style="width:11.7067in;height:9.51346in" /> 本文是学习GB-T 33116-2016 琉球球壳蜗牛检疫鉴定方法. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准规定了琉球球壳蜗牛 Acusta despecta(Gray,1839)的检疫鉴定方法。
本标准适用于琉球球壳蜗牛的检疫鉴定。
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件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T 3067 软体动物常规检疫规范
SN/T 3067 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
3.1
膜靥 epiphragm
蜗牛分泌的一种与壳口同样大小和形状的乳白色不透明黏液膜，用以封闭壳口。
3.2
阴 茎 penis
蜗牛雄性生殖器官。
注：阴茎系统一般由阴茎、阴茎本体、阴茎牵引肌和鞭状体组成。
3.3
矢囊 dart sack
蜗牛雌性生殖系统中一个藏有1枚或多枚骨针的肌肉质的囊状结构。
3.4
恋 矢 love dart
矢囊中钙质或壳质的骨针，为蜗牛交配时刺激器官。
注：恋矢的质地和形状常用于分类。
3.5
受精囊 bursa copulatrix
蜗牛的受精器官，由受精囊和受精囊柄组成。
注：其中受精囊柄的形态和有无分支常用于分类鉴定。
学名：Acusta despecta(Gray,1839),其亚种有：A.despecta
despecta(Gray,1839);A.despecta
praetenuis(Pilsbry &. Hirase,1904);A.despecta
sieboldiana(Pfeiffer,1850)。
异名：Helix despecta Gray,1839;A.despecta Sowerby,1839;Eulota
sieboldiana Pfeiffer,1905;
GB/T 33116—2016
Eulota kikaiensis Pilsbry,1902;A.despecta ikiensis(Pilsbry &.
Hirase,1904);A.despecta kikaiensis
(Pilsbry,1902)。
英文名：Ryukyu round snail;Korean round snail。
分类地位：琉球球壳蜗牛 A.despecta(Gray,1839), 在分类上属于软体动物门
Mollusca,腹足纲 Gastropoda,柄眼目Stylommatophora, 巴蜗牛科
Bradybaenidae,球壳蜗牛属 Acusta Albers,1860。 琉
球球壳蜗牛的近似种有灰球壳蜗牛 A.ravida(Benson,1842)、 红粉缘球壳蜗牛
A.tourannensis(Sou-
leyet,1842)。
琉球球壳蜗牛昼伏夜出，常隐藏在人们难以发现的地方，易于传播。其传播特点是不需要特定的寄
主，凡接触过地面的物品都可传播。传播方式和途径是确定现场检疫方式的依据。贝壳形态、软体解剖
和分子特征是实验室鉴定的主要依据。
体视显微镜、放大镜、手电筒、塑料自封袋、广口标本瓶、4 mm
孔径土壤筛、小铁铲、游标卡尺、白瓷
盘、培养皿、镊子、剪刀、显微镊子、显微剪刀、微针、解剖蜡盘、标签、移液枪、微型离心机、PCR
仪、
1.5mL 离心管、0.2 mLPCR 反应管、恒温金属浴。
75%乙醇、无水乙醇、硫酸镁、动物基因组 DNA 提取试剂盒、PCR
反应液、ddH₂O。
对来自疫区(参见附录A)
的运输工具和货物实施重点查验。仔细检查运输工具、废塑料、木质包装
箱、苗木、水果、蔬菜、花卉、未经加工的植物性材料等是否有蜗牛附着其上，琉球球壳蜗牛昼伏夜出，尤
其要注意阴暗蔽光处的检查，用手电筒仔细寻找蜗牛的行迹。琉球球壳蜗牛爬行过后，会留下银灰色的
丝带状黏液痕迹，这是判定是否有蜗牛污染的重要依据。发现蜗牛标本，随时装入塑料自封袋或标本
瓶，带回实验室做进一步的检验鉴定。发现盆景等携带土壤或其他细碎衬垫材料时，需过筛检查是否有
卵或幼螺。
用游标卡尺测量蜗牛贝壳的壳高和壳宽、卵粒直径。用肉眼或放大镜或体视显微镜仔细观察卵和
螺的形态特征。
将闷杀(见10.1)处理后的标本，参照SN/T 3067解剖软体，分离出生殖系统。
GB/T 33116—2016
8.2 球蜗牛属 Acusta Albers,1860 鉴定特征
贝壳圆球形，有脐孔，体螺层特大，膨胀，胚螺层常光滑，口缘呈椭圆形，口唇简单，锋利。阴道上的
矢囊十分长，恋矢石灰质，无鞭状体。
8.3 琉球球壳蜗牛A.despecta(Gray,1839) 鉴定特征
卵粒圆形，白色，直径2.0 mm 左右。
8.3.2.1 成螺
贝壳中等大小，壳质薄，但坚固，呈圆球形。有5个～6个螺层，前几个螺层均匀增长，略凸出，螺旋
部低矮，呈矮圆锥形。体螺层增长迅速，下部特别膨大，呈弧形。壳顶钝，缝合线深。壳面为褐黄色或淡
褐色或赤褐色，具有细致而稠密的生长线和较粗的皱纹。壳口宽大圆形，口缘简单，不外折，锋利，内唇
贴覆于体螺层上形成细薄的淡白色胼胝部，轴缘外折，略遮盖脐孔。脐孔狭小，呈孔穴状。壳高
17.5 mm～21.0 mm,壳宽21.0 mm～23.0 mm。 参见附录 B 中图 B.1。
本种有三个亚种：琉球球壳蜗牛指名亚种 A.despecta
despecta(Gray,1839);锡伯琉球球壳蜗牛 A.despecta
sieboldiana(Pfeiffer,1850);镶边琉球球壳蜗牛 A.despecta
praetenuis(Pilsbry &.
Hirase,1904)。 各亚种之间在形态上基本一致，略有微小差异。参见附录 C 中
表 C.1。
8.3.2.2 幼螺
幼螺贝壳较小，壳质薄，透明，易碎，形态特征与成螺贝壳基本一致。
动物软体多为淡灰色到茶色，螺体色泽变化较大，
一般透过贝壳可以看到动物外套膜的形态。触角
颜色明显比腹足为深。参见图 B.2。
输卵管短、粗大。阴道有部分插入到矢囊，远端稍呈球形到扁球形。副矢囊被压扁成弧状，中间有
两枝黏液腺，分叉成葡萄状。输精管和阴茎本体之间的界限不明显。阴茎牵引肌的基部稍变粗。阴茎
鞘明显比阴茎牵引肌肥厚，粗细均匀。受精囊顶部稍肥厚，其后逐渐变细。受精囊呈小乳头状。参
见图 B.3。
按附录 D 方法提取DNA、PCR
扩增和双向测序，将所测序列与已知琉球球壳蜗牛的 COI 基因序
列(Genbank 登录号为 AB852623.1) 进行比对，相似度一般应≥92%。参见附录D。
以贝壳形态为基本鉴定依据，螺体和生殖系统解剖形态为辅助鉴定特征，并注意与近似种鉴别(参
见表C.2),符合8.3.2或同时符合8.3.2、8.3.3、8.3.4形态特征的蜗牛鉴定为琉球球壳蜗牛
A.despecta
(Gray,1939)。 单独查获的卵粒符合8.3.1形态特征，应通过孵化和饲养实验(参见
SN/T 3067),做进
GB/T 33116—2016
一步的鉴定。符合8.3.5作为前期初筛或最终鉴定结果的分子佐证。
将蜗牛置于盛满水的瓶中，盖上瓶盖，进行闷杀，蜗牛在慢慢窒息的死亡过程中，逐渐伸展身体；或
逐渐加入少量硫酸镁，进行麻醉闷杀。
将闷杀后伸展的蜗牛标本置于无水乙醇中浸泡1 d～2d,
然后在75%乙醇溶液中固定，每隔1 d~
2d 换1次乙醇溶液，共换3次～4次，便可长期保存于75%乙醇溶液中。
经处理后的标本，至少妥善保存6个月，并注明时间、产地、寄主、采集人等信息。
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(资料性附录)
琉球球壳蜗牛寄主、地理分布及其他信息
A.1 寄主植物
杂食性，以各种绿色植物为食。幼螺以腐殖质、植物的幼苗和嫩芽为食；成螺取食各种绿色植物的
茎、叶和果实，喜食蔬菜和花卉等园艺作物。
A.2 地理分布
日本、朝鲜、缅甸、东帝汶、前苏联、美国(关岛)、中国(台湾)。
A.3 生物学习性与危害性
琉球球壳蜗牛 Acusta
despecta(Gray,1939)是我国颁布的进境植物检疫性有害生物。该蜗牛有
明显的夏眠和冬眠习性，常以蜡状膜犀封闭壳口越冬越夏。当环境条件不利时，尽管不在休眠季节，该
螺也会分泌黏液形成白色的膜犀封住壳口，以抵御外界不良环境，该蜗牛的这一习性决定了它可在无水
分和食物的情况下长时间远距离传播。琉球球壳蜗牛是一种重要的农业、园艺有害生物，常危害粮、棉、
麻、蔬菜、豆类等农作物以及桑、果树、花卉、烟草等经济作物。该蜗牛不但直接危害作物，而且蜗牛爬行
过后留下的白色黏液痕迹，大大降低了水果蔬菜的商品价值，同时该蜗牛可传播人畜共患寄生虫病，影
响人类健康和畜牧生产。
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(资料性附录)
琉球球壳蜗牛形态及生殖系统特征
图 B.1 和图 B.2 分别为锡伯琉球球壳蜗牛成螺贝壳形态及成螺形态，图 B.3
为镶边琉球球壳蜗牛
生殖系统特征。
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图 B.1 锡伯琉球球壳蜗牛成螺贝壳形态
GB/T 33116—2016
style="width:12.06007in;height:8.94652in" />
图 B.2 锡伯琉球球壳蜗牛成螺形态
style="width:8.24663in;height:12.81984in" />GB/T 33116—2016
P
阴茎；
阴茎牵引肌；
输精管；
矢囊 ；
副矢囊；
黏液腺；
受精囊柄 ；
受精囊；
二性管；
蛋白腺。
图 B.3 镶边琉球球壳蜗牛生殖系统特征
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(资料性附录)
琉球球壳蜗牛各亚种及近似种的鉴别特征比较
琉球球壳蜗牛各亚种及近似种的鉴别特征比较见表 C. 1 和表C.2。
表 C. 1 琉球球壳蜗牛三个亚种鉴别特征比较
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17.5 mm×21.0 mm | 21.0 mm×23.0 mm | 18.5 mm×22.0 mm |
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表 C.2 琉球球壳蜗牛与近似种的鉴别特征比较
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17.0 mm×22.0 mm |
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19.6 mm×21.5 mm |
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GB/T 33116—2016
表 C.2 ( 续)
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(资料性附录)
琉球球壳蜗牛 COI 基因辅助鉴定方法
D.1 DNA 提取
取适量腹足肌肉，用 SDS 方法或动物基因组 DNA 试剂盒方法提取DNA。
D.2 COI 基因引物
LCO1490:5'-GGTCAACAAATCATAAAGATATTG-3'
HCO2198:5'-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3'
D.3 反应体系
反应体系为20μL: 其 中 DNA 模板2μL,LCO1490(10 μmol/L)0.5μL,HCO2198(10
μmol/L)
0.5 μL,2×Master Mix 10μL,ddH2O7μL。
D.4 PCR 扩增条件
94℃ 5 min;94℃ 50 s,45℃ 30 s,72℃ 50 s,30 个～35个循环；72℃ 10 min,4℃。
D.5 测序
将 PCR 扩增样品送有资质的生物技术公司测序。
D.6 比对鉴定
将双向测序获得的600 bp～700 bp长度的DNA
序列片段，经软件拼接和人工校对后，与已知琉球 球壳蜗牛的 COI
基因序列(Genbank 登录号为 AB852623.1) 进行比对，相似度≥92%的待鉴样品确定
为琉球球壳蜗牛的疑似样品。
更多内容 可以 GB-T 33116-2016 琉球球壳蜗牛检疫鉴定方法. 进一步学习